昆蟲(chóng)VN試劑盒 試驗(yàn)原理：
昆蟲(chóng)VN試劑盒 是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知待測(cè)物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將待測(cè)物質(zhì)和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。
試劑盒內(nèi)容及其配制
自備材料
1）蒸餾水。
2）加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1）避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
2）實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3）不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項(xiàng)
1）試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
2）實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6）洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7）底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8）加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
9）按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
1）血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3）細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5）保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70
℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準(zhǔn)備
1）標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。
2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋?zhuān)赫麴s水50倍稀釋。
操作步驟
1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2）根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8）取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9）在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
局限
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到精確的結(jié)果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：最小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
結(jié)果判斷與分析
1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的待測(cè)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的待測(cè)物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
用戶評(píng)論(共6條評(píng)論)
酶聯(lián)生物經(jīng)過(guò)不斷的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化和改進(jìn)，積累了大量的經(jīng)驗(yàn)，擁有專(zhuān)業(yè)的酶聯(lián)研發(fā)團(tuán)隊(duì)。利用專(zhuān)業(yè)的酶聯(lián)免疫技術(shù)自主研發(fā)的elisa試劑盒，能對(duì)血清及其它樣本定量檢測(cè)抗原，定性檢測(cè)特異性抗體。優(yōu)質(zhì)的試劑，先進(jìn)的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA檢測(cè)的方便性、穩(wěn)定性、重復(fù)性和可靠性方面都具有很大的優(yōu)勢(shì)。
ELISA檢測(cè)技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：
1、雙抗體夾心法檢測(cè)抗原 2、間接法檢測(cè)抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術(shù)進(jìn)行樣本檢測(cè)。
以上代測(cè)費(fèi)，凡購(gòu)買(mǎi)本公司試劑盒，我們免費(fèi)代測(cè)！
凡購(gòu)買(mǎi)本公司目錄任何一種酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，您只需將需要檢測(cè)的動(dòng)物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey,
Pig……）種類(lèi)和檢測(cè)指標(biāo)（白介素類(lèi)、激素類(lèi)）及標(biāo)本數(shù)量（48T/96T）通知公司業(yè)務(wù)員即可。在接到客戶標(biāo)本當(dāng)日起，現(xiàn)貨產(chǎn)品一周內(nèi)將檢測(cè)報(bào)告交到客戶手中！
歡迎各科研單位在各種項(xiàng)目上與我們公司開(kāi)展不同層次的密切合作，以雙贏求發(fā)展，共同進(jìn)步，為中國(guó)檢測(cè)事業(yè)的發(fā)展積累經(jīng)驗(yàn)。
二、樣本要求
在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè)，對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本，請(qǐng)?jiān)炷Ｈ〔暮螅瑢?biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。代測(cè)放免標(biāo)本的客戶取材前須向我司銷(xiāo)售人員索要說(shuō)明書(shū)，具體操作注意事項(xiàng)請(qǐng)與我司技術(shù)人員溝通。
液體類(lèi)標(biāo)本：標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。
血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
血漿：應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10%（v/v）抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
尿液、胸腹水、腦脊液：用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.0-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
三、寄標(biāo)本時(shí)需注明以下情況：
1、標(biāo)本編號(hào)；2、所測(cè)項(xiàng)目；3、是否做復(fù)孔；3、聯(lián)系方式；4、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回。
客戶須知：
客戶應(yīng)對(duì)所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。
貼壁培養(yǎng)與懸浮培養(yǎng)選哪個(gè)?
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)在于能夠控制細(xì)胞繁殖的物理化學(xué)環(huán)境（
即溫度、
pH值、滲透壓、O2和CO2張力
）和生理環(huán)境（即激素和營(yíng)養(yǎng)濃度
）。除溫度外，培養(yǎng)環(huán)境由生長(zhǎng)培養(yǎng)基控制。雖然細(xì)胞培養(yǎng)的生理環(huán)境不如其物理化學(xué)環(huán)境明確，但是通過(guò)更好地了解血清成分、確定增殖所需的生長(zhǎng)因子以及更好地了解培養(yǎng)過(guò)程中的細(xì)胞微環(huán)境（即細(xì)胞間相互作用、氣體擴(kuò)散、細(xì)胞
-基質(zhì)相互作用），現(xiàn)在
酶聯(lián)生物可以采用無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行一些細(xì)胞系的培養(yǎng)。
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目前主要有兩種基本的細(xì)胞培養(yǎng)體系
1. 一種是使細(xì)胞在人工基質(zhì)上單層生長(zhǎng)（貼壁培養(yǎng)）。
2. 一種是使細(xì)胞在培養(yǎng)基中自由漂浮生長(zhǎng)（懸浮培養(yǎng)）。
貼壁培養(yǎng)
來(lái)自脊椎動(dòng)物的大多數(shù)細(xì)胞，除了造血細(xì)胞系和少數(shù)其他細(xì)胞系，都是貼壁依賴(lài)性的，必須在經(jīng)過(guò)專(zhuān)門(mén)處理以允許細(xì)胞粘附和擴(kuò)散的合適基質(zhì)上培養(yǎng)。
懸浮培養(yǎng)
但許多細(xì)胞系也可采用懸浮培養(yǎng)。大多數(shù)市售昆蟲(chóng)細(xì)胞系在單層或懸浮培養(yǎng)物中生長(zhǎng)良好。懸浮培養(yǎng)細(xì)胞可在未經(jīng)組織培養(yǎng)處理的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，但隨著培養(yǎng)物體積與表面積之比（通常為
0.2-0.5mL/cm2）的增加，阻礙了氣體的充分交換，因此需要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行攪拌。這種攪拌
一般通過(guò)磁力攪拌器或者旋轉(zhuǎn)瓶實(shí)現(xiàn)。
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以下是貼壁培養(yǎng)與懸浮培養(yǎng)兩種培養(yǎng)方式在適用類(lèi)型，傳代方式，采用酶法，細(xì)胞生長(zhǎng)，培養(yǎng)方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果方面的詳細(xì)對(duì)比。
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貼壁培養(yǎng)
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懸浮培養(yǎng)
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需要使用經(jīng)過(guò)組織培養(yǎng)處理的容器
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無(wú)需通過(guò)酶法或機(jī)械方法解離細(xì)胞
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細(xì)胞生長(zhǎng)受到表面積限制 ,
從而可能限制細(xì)胞產(chǎn)量
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細(xì)胞生長(zhǎng)受到培養(yǎng)基中細(xì)胞濃度的限制 ,
易于擴(kuò)大規(guī)模培養(yǎng)
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包括原代細(xì)胞在內(nèi)的大多數(shù)細(xì)胞類(lèi)型
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適應(yīng)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞和其他一些無(wú)粘附性的細(xì)胞(如造血細(xì)胞)
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需要定期傳代 ,
但易于在倒置顯微鏡下進(jìn)行目視檢驗(yàn)
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較易傳代但需要每天進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和存活率測(cè)定
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可連續(xù)收獲產(chǎn)物 ,
用于細(xì)胞學(xué)研究等多種研究應(yīng)用
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可在未經(jīng)組織培養(yǎng)處理的培養(yǎng)容器中進(jìn)行培養(yǎng) ,
需要攪動(dòng)以便進(jìn)行充分氣體交換
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總 結(jié) : 細(xì)胞的后續(xù)實(shí)驗(yàn)往往決定了細(xì)胞培養(yǎng)的形式和培養(yǎng)基，除了經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)組織培養(yǎng)處理和未經(jīng)處理的表面外，還使用了其他表面改良技術(shù)來(lái)獲得預(yù)期的細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果。
找尋抗體，試劑，細(xì)胞裂解液，試劑盒
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