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農(nóng)殘及其它檢測 動(dòng)物金標(biāo)試劑盒 金標(biāo)試劑盒 毒素Toxin 致病菌 動(dòng)物保健 食品添加劑 生理活性物 色素Pigment 科研項(xiàng)目 農(nóng)藥Pesticide 抗生素Antibiotic 性激素Hormone 瘦肉精β-agonists 重金屬Heavy-Metal 其他食品檢測試劑盒 過敏原/營養(yǎng)抑制因子 防霉劑Mold inhibitor 抗病毒Antivirus drug 保化添加物 水產(chǎn)殺菌劑 動(dòng)物酶免試劑盒 酶免試劑盒 其他檢測類 環(huán)境污染物 乳品添加物 材料助劑 食品加工危害物
PCR試劑盒 PCR檢測試劑盒 探針法qPCR試劑盒
生化試劑盒 氧化磷酸化系列 植物激素系列 氧化與抗氧化系列 果膠系列 輔酶Ⅱ系列 谷胱甘肽系列 維生素C代謝系列 氮代謝系列 氨基酸代謝系列 酯酶系列 三羧酸循環(huán)系列 糖酵解系列 蛋白酶系列 脂肪酸代謝系列 淀粉系列 蔗糖系列 糖代謝系列 P450系列 離子系列 土壤系列 信號(hào)系列 其它系列 蛋白含量測定系列 糖異生系列 糖原系列 維生素系列 光合作用系列 輔酶Ⅰ系列 花青素合成系列 乙醛酸循環(huán)系列 海藻糖系列
酶聯(lián)抗體 一抗 內(nèi)參抗體 抗體相關(guān)支持試劑 標(biāo)簽抗體
動(dòng)物血清及細(xì)胞培養(yǎng) 胎牛血清 其他動(dòng)物血清 裂解血 小牛血清 新生牛血清 其他同類產(chǎn)品 細(xì)胞檢測及細(xì)胞保護(hù)試劑 抗生素及選擇性試劑 細(xì)胞凍存液 培養(yǎng)基營養(yǎng)添加劑 動(dòng)物疫苗專用血清 診斷試劑專用血制品 新西蘭Bovogen血清
代理品牌 免疫學(xué)類 分子學(xué)類 生化學(xué)類
二抗 AP標(biāo)記二抗 Biotin標(biāo)記二抗 HRP標(biāo)記二抗 PE標(biāo)記二抗 熒光標(biāo)記二抗 其他二抗
細(xì)胞系 人細(xì)胞系 豬細(xì)胞系 猴細(xì)胞系 小鼠細(xì)胞系 大鼠細(xì)胞系 其他細(xì)胞系
技術(shù)支持與外包實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)外包服務(wù) 技術(shù)支持 常見問題
原代細(xì)胞 人原代細(xì)胞 大鼠原代細(xì)胞 小鼠原代細(xì)胞 兔原代細(xì)胞 豬原代細(xì)胞 其他原代細(xì)胞 雞原代細(xì)胞
細(xì)胞專用培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 兔細(xì)胞專用培養(yǎng)基 人細(xì)胞專用培養(yǎng)基 細(xì)胞系專用培養(yǎng)基 小鼠細(xì)胞專用培養(yǎng)基 大鼠細(xì)胞專用培養(yǎng)基 其他細(xì)胞專用培養(yǎng)基 LUC細(xì)胞專用培養(yǎng)基 永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基
完全培養(yǎng)基 完全培養(yǎng)基 人完全培養(yǎng)基 大鼠完全培養(yǎng)基 小鼠完全培養(yǎng)基 其他完全培養(yǎng)基
細(xì)胞庫 菌株 細(xì)胞株 永生化細(xì)胞 耐藥細(xì)胞株 熒光示蹤穩(wěn)株 luc示蹤細(xì)胞株 細(xì)胞凍存液
病理染色液 HE染色 骨組織染色 碳水化合物染色 固定液 結(jié)締組織染色 脫鈣液 酶類染色 細(xì)胞染色 植物染色 指示劑 其他染色 微生物染色 核酸染色 金屬及鹽染色 神經(jīng)染色 脂類染色 色素染色
生化試劑 氨基酸類 蛋白質(zhì)類 維生素類 緩沖劑類 培養(yǎng)基類 酶類 碳水化合物類 色素類 植物激素及核酸類 表面活性劑類 其他生化試劑 抗生素類 測試盒類 分離材料及耗材類 其它試劑類 石墨烯所有產(chǎn)品 常見生化試劑
標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 中藥標(biāo)準(zhǔn)品 對照藥材 中檢所產(chǎn)品 標(biāo)準(zhǔn)溶液 化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 中國計(jì)量院
細(xì)胞株 人源性細(xì)胞株 小鼠源性細(xì)胞株 大鼠源性細(xì)胞株 酵母菌 大鼠原代細(xì)胞 小鼠原代細(xì)胞 人原代細(xì)胞 兔原代細(xì)胞 其他原代細(xì)胞 其他源性細(xì)胞株
進(jìn)口國產(chǎn)培養(yǎng)基 美國藥典培養(yǎng)基 化妝品檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸桿菌、大腸菌群 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn) 消毒滅菌效果評價(jià) 臨床檢驗(yàn)用培養(yǎng)基 中華人民共和國藥典 歐洲藥典(EP) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法 微生物檢驗(yàn) 腸球菌、鏈球菌 沙門氏菌、志賀氏菌 弧菌 彎曲桿菌 李斯特氏菌 產(chǎn)氣莢膜梭菌 阪崎腸桿菌 乳酸菌、雙歧桿菌 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 一次性試管、液體培養(yǎng)基 乳酸菌檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測定、無菌檢驗(yàn) 顯色培養(yǎng)基 植物組培
酶標(biāo)儀 酶標(biāo)儀 洗板機(jī)
細(xì)胞培養(yǎng)類 細(xì)胞株 動(dòng)物細(xì)胞 人細(xì)胞類 細(xì)胞分離液 細(xì)胞系 品牌細(xì)胞 ATCC細(xì)胞
英國IDS IDS EILSA劑盒
感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞 發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞 酵母感受態(tài)細(xì)胞 根癌農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞 克隆感受態(tài)細(xì)胞
農(nóng)牧食品殘留有害檢測 保化快速檢測系列 便攜綜合解決方案 非法添加快檢系列 劣質(zhì)油快篩系列 農(nóng)殘留快檢系列 獸殘疫病快檢系列 微生物快檢系列 重金屬快檢系列
其他試劑盒 其他產(chǎn)品
分子生物學(xué)試劑 DNA溶液 RNA溶液 蛋白電泳 蛋白其他 核酸電泳 核酸提取 核酸雜交 酶抑制劑 免疫印跡 核酸其他 分子生物學(xué)試劑 蛋白提取與檢測
標(biāo)準(zhǔn)溶液 標(biāo)準(zhǔn)溶液 滴定液
常規(guī)溶液 抗凝劑 其他溶液 藥典溶液
細(xì)胞生物學(xué)試劑 抗生素 細(xì)胞檢測 細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞其他 細(xì)胞組分分離
免疫學(xué)試劑 免疫學(xué)試劑
檢測試劑盒 生化檢測 酶類檢測 植物檢測 氧化檢測
形態(tài)病理檢測 脫鈣 石蠟包埋 石蠟切片 普通病理染色 免疫組化熒光 切片全景掃描 TUNEL
分子病理 分子病理
超微病理 超微病理
生化檢測類 HPLC試劑盒 核苷酸系列 色素系列 抗生素殘留系列 植物黃酮系列 甾醇系列 木質(zhì)素單體系列 中藥成分系列 生物堿系列 生物胺系列 不飽和脂肪酸系列 動(dòng)物激素系列 花色苷系列 有機(jī)酸系列 植物多酚系列
酶聯(lián)產(chǎn)品
科研ELISA 科研人Elisa 科研大鼠Elisa 科研小鼠Elisa 科研兔Elisa 科研豬Elisa 科研雞Elisa
農(nóng)殘及其它檢測 動(dòng)物金標(biāo)試劑盒 金標(biāo)試劑盒 毒素Toxin 致病菌 動(dòng)物保健 食品添加劑 生理活性物 色素Pigment 科研項(xiàng)目 農(nóng)藥Pesticide 抗生素Antibiotic 性激素Hormone 瘦肉精β-agonists 重金屬Heavy-Metal 其他食品檢測試劑盒 過敏原/營養(yǎng)抑制因子 防霉劑Mold inhibitor 抗病毒Antivirus drug 保化添加物 水產(chǎn)殺菌劑 其他檢測類 環(huán)境污染物 乳品添加物 材料助劑 食品加工危害物
PCR試劑盒 PCR檢測試劑盒 探針法qPCR試劑盒
生化試劑盒 氧化磷酸化系列 植物激素系列 氧化與抗氧化系列 果膠系列 輔酶Ⅱ系列 谷胱甘肽系列 維生素C代謝系列 氮代謝系列 氨基酸代謝系列 酯酶系列 三羧酸循環(huán)系列 糖酵解系列 蛋白酶系列 脂肪酸代謝系列 淀粉系列 蔗糖系列 糖代謝系列 P450系列 離子系列 土壤系列 信號(hào)系列 其它系列 蛋白含量測定系列 糖異生系列 糖原系列 維生素系列 光合作用系列 輔酶Ⅰ系列 花青素合成系列 乙醛酸循環(huán)系列 海藻糖系列
酶聯(lián)抗體 一抗 內(nèi)參抗體 抗體相關(guān)支持試劑 標(biāo)簽抗體
二抗 AP標(biāo)記二抗 Biotin標(biāo)記二抗 HRP標(biāo)記二抗 PE標(biāo)記二抗 熒光標(biāo)記二抗 其他二抗
細(xì)胞系 人細(xì)胞系 豬細(xì)胞系 猴細(xì)胞系 小鼠細(xì)胞系 大鼠細(xì)胞系 其他細(xì)胞系
原代細(xì)胞 人原代細(xì)胞 大鼠原代細(xì)胞 小鼠原代細(xì)胞 兔原代細(xì)胞 豬原代細(xì)胞 其他原代細(xì)胞 雞原代細(xì)胞
細(xì)胞專用培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 兔細(xì)胞專用培養(yǎng)基 人細(xì)胞專用培養(yǎng)基 細(xì)胞系專用培養(yǎng)基 小鼠細(xì)胞專用培養(yǎng)基 大鼠細(xì)胞專用培養(yǎng)基 其他細(xì)胞專用培養(yǎng)基 LUC細(xì)胞專用培養(yǎng)基 永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基
細(xì)胞庫 菌株 細(xì)胞株 永生化細(xì)胞 耐藥細(xì)胞株 熒光示蹤穩(wěn)株 luc示蹤細(xì)胞株 細(xì)胞凍存液
病理染色液 HE染色 骨組織染色 碳水化合物染色 固定液 結(jié)締組織染色 脫鈣液 酶類染色 細(xì)胞染色 植物染色 指示劑 其他染色 微生物染色 核酸染色 金屬及鹽染色 神經(jīng)染色 脂類染色 色素染色
酶標(biāo)儀 酶標(biāo)儀 洗板機(jī)
其他試劑盒 其他產(chǎn)品
細(xì)胞生物學(xué)試劑 抗生素 細(xì)胞檢測 細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞其他 細(xì)胞組分分離
免疫學(xué)試劑 免疫學(xué)試劑
形態(tài)病理檢測 脫鈣 石蠟包埋 石蠟切片 普通病理染色 免疫組化熒光 切片全景掃描 TUNEL
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PC-12(Undifferentiated)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(未分化)主圖

PC-12(Undifferentiated)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(未分化)

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PC-12(Undifferentiated)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(未分化)

基本信息

產(chǎn)品品牌 :酶聯(lián)生物

中文名稱 :大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(未分化)

細(xì)胞簡稱 :PC -12(U ndifferen tiated )

細(xì)胞形態(tài) :圓形

生長特性 :疏松貼壁

培養(yǎng)環(huán)境 :空氣,95% ;CO2,5% 37℃

凍存條件 :55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40% FBS+5% D M SO液氮

完全培養(yǎng)基 :RPM I-1640(P M 150110)+15% H S(164215)+5% F B S(164210-50)+1%P /S(P B 180120)

傳代步驟

1、該細(xì)胞為半貼壁半懸浮細(xì)胞,懸浮細(xì)胞是活細(xì)胞,可用離心管收集細(xì)胞懸液后,于1200 rpm (250g左右)離心收集細(xì)胞。

2、部分貼壁不牢的細(xì)胞可直接吹起使之懸浮。

3、貼壁較牢固的細(xì)胞可用PBS潤洗后,在培養(yǎng)瓶中加入1~2毫升0.25% 胰蛋白酶溶液(含ED T A )置于 37℃培養(yǎng)箱中消化,待細(xì)胞變圓收縮后可用4~ 6 m L左右完全培養(yǎng)基進(jìn)行終止消化,輕輕吹散細(xì)胞后離心搜集細(xì)胞。

4、將懸浮的細(xì)胞和貼壁的細(xì)胞收集到一起混勻后按比例接種到新的培養(yǎng)瓶。

消化時(shí) :1~ 2分鐘

傳代比例(密度) :1:2-1:4

換液頻次 :2~ 3次/周

細(xì)胞背景描述

PC -12(U ndifferen tiated)細(xì)胞是來自能移植的雄性大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤。PC -12(U ndifferen tiated)細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)生長因子(N G F)受體,NG F可誘導(dǎo)產(chǎn)生神經(jīng)表型。PC -12(U ndifferen tiated)細(xì)胞不合成腎上腺素。

供體年齡 :雄

組織來源 :腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤

細(xì)胞類型 :腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 :嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞

收到常溫細(xì)胞后如何處理

細(xì)胞培養(yǎng)詳細(xì)操作步驟請參照酶聯(lián)生物細(xì)胞培養(yǎng)操作指南

1.收到常溫細(xì)胞后,及時(shí)拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象。

2.用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4.靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片 將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。

5.若觀察到異常或者對細(xì)胞有疑問,請及時(shí)跟我們聯(lián)系;對于細(xì)胞培養(yǎng)操作及培養(yǎng)。可跟我們的技術(shù)支持交流。

售前須知

1、PC -12(U ndifferen tiated)細(xì)胞正常生長狀態(tài)為懸浮聚團(tuán),若需要用N G F誘導(dǎo)時(shí),需要使用多聚-L-賴氨酸溶液包被培養(yǎng)瓶后促使細(xì)胞貼壁。

2、U ndifferen tiated、Low differen tiation和Highdifferen tiation的區(qū)別:U ndifferen tiated的PC -12從形態(tài)上看是圓形的,聚團(tuán)生長的漂浮細(xì)胞;Low differen tiation的成多角形,有較短的突起;Highdifferen tiation的細(xì)胞有多個(gè)突起,突起數(shù)目不等,突觸較長,類似神經(jīng)元軸突。

3、Lowdifferen tiation和Highdifferen tiation是在U ndifferen tiated的PC -12基礎(chǔ)上誘導(dǎo)產(chǎn)生的,Lowdifferen tiation和Highdifferen tiation指的與神經(jīng)細(xì)胞表型的相似程度,Highdifferen tiation更接近神經(jīng)細(xì)胞表型。

用戶評論(共6條評論)

  • 辦事效率蠻高,幾天,就幫我搞定了這個(gè)試劑盒,謝謝!
  • 盒子蠻不錯(cuò),包含所需試劑,并提供了中英文雙版說明書及增值稅發(fā)票,很正規(guī),銷售人員的態(tài)度也謙和。
  • 靈敏度不錯(cuò),重復(fù)性也行,試劑盒在我做的這些實(shí)驗(yàn)中,與國內(nèi)同行的盒子相比來說,性價(jià)比挺高的,尤其是價(jià)格占有不錯(cuò)的優(yōu)勢,贊一個(gè)!
  • 操作挺方便的,也簡單,當(dāng)然,這也多虧了公司的技術(shù)人員詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo),很好,謝謝,實(shí)驗(yàn)也相當(dāng)成功。
  • 實(shí)驗(yàn)出來的標(biāo)準(zhǔn)曲線很不錯(cuò)(很優(yōu)美),而且價(jià)格相對合理,技術(shù)指導(dǎo)很到位......
  • 我購買了兩盒,批次最新,保質(zhì)期內(nèi),實(shí)驗(yàn)結(jié)果做出來了,貨到的挺快,那么遠(yuǎn),幾天就到了,加上我做實(shí)驗(yàn),一共五天就搞定了。
  • 經(jīng)朋友介紹,購買了此公司的ELISA試劑盒,用過,還不錯(cuò),實(shí)驗(yàn)效果很好,基本達(dá)到實(shí)驗(yàn)參數(shù)要求,如果,下次還做實(shí)驗(yàn)的話,我還買這家的,朋友這幾年都在用這家的(長期訂貨)。

酶聯(lián)生物經(jīng)過不斷的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化和改進(jìn),積累了大量的經(jīng)驗(yàn),擁有專業(yè)的酶聯(lián)研發(fā)團(tuán)隊(duì)。利用專業(yè)的酶聯(lián)免疫技術(shù)自主研發(fā)的elisa試劑盒,能對血清及其它樣本定量檢測抗原,定性檢測特異性抗體。優(yōu)質(zhì)的試劑,先進(jìn)的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA檢測的方便性、穩(wěn)定性、重復(fù)性和可靠性方面都具有很大的優(yōu)勢。

ELISA檢測技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
1、雙抗體夾心法檢測抗原 2、間接法檢測抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術(shù)進(jìn)行樣本檢測。

以上代測費(fèi),凡購買本公司試劑盒,我們免費(fèi)代測!
凡購買本公司目錄任何一種酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,您只需將需要檢測的動(dòng)物(Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey, Pig……)種類和檢測指標(biāo)(白介素類、激素類)及標(biāo)本數(shù)量(48T/96T)通知公司業(yè)務(wù)員即可。在接到客戶標(biāo)本當(dāng)日起,現(xiàn)貨產(chǎn)品一周內(nèi)將檢測報(bào)告交到客戶手中!
歡迎各科研單位在各種項(xiàng)目上與我們公司開展不同層次的密切合作,以雙贏求發(fā)展,共同進(jìn)步,為中國檢測事業(yè)的發(fā)展積累經(jīng)驗(yàn)。

二、樣本要求
在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測,對收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測的標(biāo)本,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本,請?jiān)炷H〔暮螅瑢?biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,所以避免反復(fù)凍融。代測放免標(biāo)本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書,具體操作注意事項(xiàng)請與我司技術(shù)人員溝通。

液體類標(biāo)本:標(biāo)本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。

血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

血漿:應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

尿液、胸腹水、腦脊液:用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.0-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

三、寄標(biāo)本時(shí)需注明以下情況:
1、標(biāo)本編號(hào);2、所測項(xiàng)目;3、是否做復(fù)孔;3、聯(lián)系方式;4、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回。

客戶須知:
客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負(fù)責(zé),如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。

 

為什么要進(jìn)行細(xì)胞系的STR鑒定

 

什么是細(xì)胞系鑒定?

 

所謂細(xì)胞系鑒定即通過 STR(短串聯(lián)重復(fù))圖譜所建立細(xì)胞系的遺傳特征。一株細(xì)胞系的遺傳特征確立后,細(xì)胞系可以通過定期的檢測,以防止出現(xiàn)細(xì)胞系被誤認(rèn)或交叉污染的情況。

 

為什么要進(jìn)行細(xì)胞系鑒定?

 

首先進(jìn)行細(xì)胞系 STR鑒定是很重要的。很多生物醫(yī)藥的研究都采用培養(yǎng)細(xì)胞來進(jìn)行,據(jù)估計(jì),15-20%的實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)中所使用的細(xì)胞已經(jīng)不是原來的細(xì)胞系,或者與其它細(xì)胞系發(fā)生了交叉污染。顯然,細(xì)胞系遭到污染、特征鑒別錯(cuò)誤,將會(huì)極大的威脅著基于這些細(xì)胞而發(fā)表的論文質(zhì)量和研究發(fā)現(xiàn)的正確性。為此,很多細(xì)胞庫現(xiàn)在都要對提交來的細(xì)胞系進(jìn)行鑒定,并對細(xì)胞系之間的交叉污染進(jìn)行監(jiān)測。

 

什么細(xì)胞最容易污染別的細(xì)胞?

 

Hela細(xì)胞。五十多年來,Hela細(xì)胞系被廣泛用于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域的研究,對當(dāng)代生命科學(xué)的發(fā)展屢建奇功,是名副其實(shí)的生物學(xué)研究的親歷踐行者。同時(shí)很多被廣泛研究的細(xì)胞系都被Hela細(xì)胞淹沒,因?yàn)樗L得快,當(dāng)你發(fā)現(xiàn)自己的一個(gè)培養(yǎng)瓶里的細(xì)胞突然長得很好,而以后都用它傳代做實(shí)驗(yàn)的話,十之八九是搞錯(cuò)了。 早在1967年,遺傳學(xué)家StanleyGartler發(fā)現(xiàn)HEp-2和INT407這兩種細(xì)胞系都是生物學(xué)領(lǐng)域研究最多的腫瘤細(xì)胞系——Hela細(xì)胞。

 

有哪些細(xì)胞曾被 Hela污染?

 

lnt-407、HEp-2、WISH(人羊膜細(xì)胞)、Acc-M(人原發(fā)性延腺癌細(xì)胞)、Bcap-37 (人乳腺癌細(xì)胞)、HAC-84(人肺腺癌克隆)、Hepatoma(人肝癌細(xì)胞)、HUL-42(人肺腺癌細(xì)胞)、CNE(人鼻咽癌細(xì)胞)、SPC-A-1(人肺腺癌細(xì)胞)、Tca-8113(人舌鱗癌細(xì)胞)、YTMLC(個(gè)舊肺鱗癌細(xì)胞)等一百余種。

 

如何進(jìn)行細(xì)胞系鑒定?

 

細(xì)胞系鑒定目前主要基于國際身份認(rèn)證委員會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)。依據(jù)該標(biāo)準(zhǔn),可以通過多重?zé)晒?/font> PCR技術(shù),對人源8個(gè)STR位點(diǎn)以及1個(gè)性別決定位點(diǎn)進(jìn)行檢測。我公司做的STR 鑒定,除以上9個(gè)位點(diǎn)之外,將對檢測細(xì)胞加做12個(gè)其它位點(diǎn)信息。

 

什么時(shí)候需細(xì)胞系鑒定?

 

1)當(dāng)建立或獲得一個(gè)新的細(xì)胞系時(shí);

2)一個(gè)涉及到細(xì)胞試驗(yàn)項(xiàng)目開始/結(jié)束時(shí);

3)在細(xì)胞凍存之前,或細(xì)胞已連續(xù)培養(yǎng)2~3個(gè)月時(shí);

4)發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費(fèi)前;

5)細(xì)胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大時(shí);

6)當(dāng)實(shí)驗(yàn)室使用超過一種細(xì)胞系時(shí),所有細(xì)胞系應(yīng)先鑒定以排除交叉污染的可能。

 

如何提供鑒定樣本?

 

我公司建議客戶對每種進(jìn)行檢測的目的細(xì)胞復(fù)蘇好 T25培養(yǎng)瓶寄送活細(xì)胞,或者對每種需要進(jìn)行檢測的細(xì)胞單獨(dú)收集在1.5ml離心管中,細(xì)胞數(shù)目不少于10的6次方個(gè)。細(xì)胞需要離心沉淀,并且以PBS清洗盡可能去除上清培養(yǎng)基,沉淀進(jìn)行冰凍(干冰)保存與寄送。(推薦復(fù)蘇好T25培養(yǎng)瓶常溫寄送活細(xì)胞,細(xì)胞數(shù)目不少于10的6次方個(gè))

 

如何知道細(xì)胞系是否發(fā)生交叉污染了?

 

如果存在細(xì)胞系之間發(fā)生交叉污染,而且鑒定用的細(xì)胞可能有兩種以上的細(xì)胞系時(shí),那么在進(jìn)行 STR位點(diǎn)檢測的時(shí)候,多個(gè)位點(diǎn)會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)以上的峰。峰高值表示該等位基因的信號(hào)強(qiáng)度,理論上峰值與樣本的DNA濃度有直接的關(guān)系。因此,存在交叉污染的混合細(xì)胞系中,其中一個(gè)位點(diǎn)中某些峰會(huì)明顯高于其他的峰,其中大峰是屬于混合細(xì)胞系中那個(gè)主要細(xì)胞系,而小峰則屬于那個(gè)次要細(xì)胞系。值得注意的是,當(dāng)發(fā)生兩個(gè)或以上細(xì)胞混合的時(shí)候,檢測結(jié)果看起來非常像細(xì)胞系的“遺傳不穩(wěn)定”——當(dāng)一個(gè)細(xì)胞系存在亞群時(shí),尤其是一些癌細(xì)胞系,由于遺傳不穩(wěn)定的存在,在一些位點(diǎn)的STR特性會(huì)不同。因此經(jīng)驗(yàn)豐富的分子專家是非常重要的,他能夠幫助分析復(fù)雜的電泳圖譜(STR峰圖),從而判斷是否由于發(fā)生細(xì)胞系交叉污染而導(dǎo)致多等位基因情況。

 

如何根據(jù) STR數(shù)據(jù)判斷細(xì)胞系的身份?

 

收到細(xì)胞系鑒定結(jié)果以及 STR信息,可以與參考數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對。如果細(xì)胞樣本的每個(gè)STR位點(diǎn)和參考細(xì)胞STR位點(diǎn)都能重合匹配,即說明該細(xì)胞系正確,反之則說明你的細(xì)胞系可能被錯(cuò)誤標(biāo)記,交叉污染或發(fā)生遺傳不穩(wěn)定。一般說來,匹配度≥80%即可認(rèn)為該細(xì)胞系正確,匹配度<80%則說明該細(xì)胞系的來源需要被懷疑。

  : 如果細(xì)胞系被鑒定出發(fā)生交叉污染或錯(cuò)誤標(biāo)記,則需要拿更早代數(shù)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定,從而找到問題的起源或者直接從可靠的機(jī)構(gòu)購買一株新的細(xì)胞系。