SF9昆蟲(chóng)卵巢細(xì)胞
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
Growth Properties（生長(zhǎng)特性）: 貼壁
Organism（生物體）: 草地貪夜蛾
Source（來(lái)源）: 卵巢；自發(fā)永生；雌性
Complete growth medium: Grace’s Insect Medium(supplemented)，90%；FBS，10%；雙抗。
Temperature: 28°C
Atmosphere: air, 100%
Protocol:
1.混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液1000rpm(150g左右)離心3min，棄上清；
2.加入新鮮完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，并均勻分到培養(yǎng)皿里；
Note: 為避免細(xì)胞傳代死亡，傳代前細(xì)胞培養(yǎng)基不能完全變黃，細(xì)胞密度過(guò)高時(shí)及時(shí)換液以免細(xì)胞死亡。傳代過(guò)程吹打細(xì)胞應(yīng)盡量輕柔，不應(yīng)吹出過(guò)多氣泡。
3.28度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；傳代比例 : 視細(xì)胞生長(zhǎng)速度而定，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代。
Preservation:
1.混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液離心，棄上清，用已經(jīng)配好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞，盡快加入已經(jīng)標(biāo)記號(hào)的凍存管中；
2.將凍存管盡快依次在4度10min，-20度2h，-80過(guò)夜后液氮保存；
凍存液：92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO（配方僅供參考，客戶(hù)可以根據(jù)自身?xiàng)l件及實(shí)驗(yàn)室規(guī)定配制）
常見(jiàn)問(wèn)題:
1、細(xì)胞收貨后盡快拍照留存，以便處理售后問(wèn)題。對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有問(wèn)題當(dāng)天聯(lián)系，若收貨后未聯(lián)系或無(wú)照片視為細(xì)胞狀態(tài)良好，客戶(hù)傳代后狀態(tài)不佳將無(wú)法提供免費(fèi)重發(fā)服務(wù)。
2、自細(xì)胞簽收起一周之內(nèi)細(xì)胞自身出現(xiàn)問(wèn)題（不包含客戶(hù)自身原因?qū)е碌模峁┦肇浀募?xì)胞狀態(tài)圖片及培養(yǎng)方式反饋給訂單業(yè)務(wù)員。若客戶(hù)在出現(xiàn)問(wèn)題的時(shí)候不經(jīng)我方同意，擅自將細(xì)胞遺棄，將視為客戶(hù)自身失誤導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，我方不提供免費(fèi)重發(fā)服務(wù)。
3、細(xì)胞經(jīng)過(guò)運(yùn)輸后，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞，再離心后，用完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時(shí)碎片比較少，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
4、對(duì)于生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度，最高不超過(guò)20%，或隔數(shù)日換液的方法來(lái)保證細(xì)胞的狀態(tài)和生長(zhǎng)速度。
5、對(duì)于生長(zhǎng)不均的貼壁細(xì)胞：在培養(yǎng)過(guò)程中若出現(xiàn)細(xì)胞分布明顯不均時(shí)（即某一區(qū)域細(xì)胞已重疊生長(zhǎng)，而旁邊則為一塊空白），此時(shí)可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重新打散，貼壁，加入新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
6、使用不同胰酶及其他試劑的消化時(shí)間相差較大,不強(qiáng)行要求消化時(shí)間，20s-10min均有，總體以細(xì)胞收縮相互分離并可以輕輕吹下為準(zhǔn)終止消化。若無(wú)法準(zhǔn)確掌控胰酶作用時(shí)間 建議客戶(hù)按照下述操作：胰酶首先復(fù)溫到室溫后加入細(xì)胞，然后每隔20-30秒，即吹打下細(xì)胞，如果能夠吹打散細(xì)胞，加入完全培養(yǎng)基終止消化，如果30秒吹打不下，再等30秒重復(fù)操作。
7、凍存細(xì)胞時(shí)凍存液培養(yǎng)客戶(hù)可以根據(jù)實(shí)際情況決定，我方凍存液配方僅供參考，凍存細(xì)胞后一定要復(fù)蘇其中一支檢測(cè)凍存效果。對(duì)于客戶(hù)凍存細(xì)胞出現(xiàn)死亡，我方不提供售后服務(wù)。
8、使用干冰發(fā)貨的細(xì)胞，均發(fā)兩支凍存細(xì)胞。請(qǐng)不要一起復(fù)蘇，僅復(fù)蘇一支，將一支存放在-80冰箱或者液氮里。如復(fù)蘇有問(wèn)題，及時(shí)聯(lián)系我方，并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇另外一支。若客戶(hù)同時(shí)復(fù)蘇兩支，且細(xì)胞狀態(tài)不理想，我方無(wú)法提供免費(fèi)重發(fā)服務(wù)。
9、請(qǐng)嚴(yán)格按照隨細(xì)胞說(shuō)明書(shū)進(jìn)行培養(yǎng)，如有不清楚的地方，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系訂單業(yè)務(wù)員。勿隨意更換非隨貨說(shuō)明書(shū)的其他培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，出現(xiàn)問(wèn)題我方無(wú)法提供免費(fèi)重發(fā)服務(wù)。
售后規(guī)定:
本公司僅對(duì)細(xì)胞本身問(wèn)題負(fù)責(zé)，不對(duì)客戶(hù)傳代導(dǎo)致細(xì)胞密度過(guò)低、細(xì)胞漂浮、生長(zhǎng)緩慢、形態(tài)改變甚至污染負(fù)責(zé)。由于客戶(hù)不按要求進(jìn)行細(xì)胞操作、使用培養(yǎng)基或者客戶(hù)傳代后細(xì)胞污染、生長(zhǎng)緩慢甚至死亡等原因?qū)е率酆螅挥杳赓M(fèi)售后。
細(xì)胞售后期：自細(xì)胞簽收起一周之內(nèi)。
超出售后期，且在一個(gè)月之內(nèi)，細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，無(wú)論何種原因需重發(fā)細(xì)胞，收取細(xì)胞購(gòu)買(mǎi)費(fèi)用的半價(jià)。 超出細(xì)胞售后期，自簽收起六個(gè)月之外的，細(xì)胞出現(xiàn)任何問(wèn)題，不再提供技術(shù)支持或者售后。
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