高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液 1 瓶：（1ml/瓶）1.0ppm（高標(biāo)準(zhǔn)液有揮發(fā)性，需注意密封）
標(biāo)準(zhǔn)品溶液 0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb（均為空瓶子，現(xiàn)配現(xiàn)用）。
酶標(biāo)記物（紅蓋）…………………11ml
抗體工作液（藍(lán)蓋）………………5.5ml
底物液 A（白蓋）……………………6ml
底物液 B（黑蓋）……………………6ml
終止液（黃蓋）………………………6ml
20×濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml
5×復(fù)溶液（黃蓋）…………………50ml
說明書………………………………1 份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器：酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量 0.01g）
4.2 微量移液器：單道 20µl-200µl，100µl-1000µl、多道 300µl
4.3 試劑：三氯乙酸、甲醇
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知：
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液：
配液 1：1%三氯乙酸溶液
稱取 1g 三氯乙酸加去離子水 100ml 溶解。
配液 2：復(fù)溶液
將5×復(fù)溶液用去離子水 5 倍稀釋（1 份 5×復(fù)溶液加 4 份去離子水），用于樣本的復(fù)溶，復(fù)溶液在 4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。配液 3:工作洗滌液
將濃縮洗滌液 20 倍稀釋(1 份洗滌液加 19 份去離子水)。
5.3 樣本前處理步驟：
5.3.1 組織（雞、鴨、豬肉/肝、蝦、魚）、雞蛋樣本處理方法
1）用均質(zhì)器均質(zhì)組織、肝臟、雞蛋樣本；
2）稱取 2±0.05g 樣本于 50ml 離心管中，加入 6ml 1%三氯乙
酸溶液，振蕩 2min，室溫 4000r/min 以上，離心 10min；
3）取出 1ml 上清液于另一試管中，加入 1m 甲醇，振蕩 1min，室溫 4000r/min 以上，離心 10min；
4）取 1ml 上清液在 50-60℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈?，加?1ml 復(fù)溶液溶解殘留的干燥物；
5）取 50 µl 用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：6 檢測下限：0.6ppb 5.3.2 蜂蜜樣本處理方法
1）準(zhǔn)確稱取 1±0.05g 蜂蜜樣本于離心管中，加入 2ml 1%三氯乙酸，振蕩 2min，室溫 4000r/min 以上，離心 10min；
2）取出 100ul 上清液于另一試管中，加入 1900ul 復(fù)溶液稀釋，混合 30s；
3）取 50µl 用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：40 檢測下限：4ppb
5.3.3 尿樣本的處理方法
1）用復(fù)溶液將尿樣 10 倍稀釋（如果尿樣渾濁一定要過濾或離
心10min，4000r/min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。
2）取 50µl 稀釋的尿樣用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：10 檢測下限：1ppb
6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從 4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡 30min 以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于 2-8℃。
實(shí)驗(yàn)開始前需配制標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液；低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品不穩(wěn)定，需現(xiàn)配現(xiàn)用。
在0ppb 的瓶中加復(fù)溶液 3ml，0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、 2.7ppb 的瓶中分別加復(fù)溶液 2ml，8.1ppb 的瓶中加復(fù)溶液 3ml。
標(biāo)準(zhǔn)液 6：取 1.0ppm 高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液 24.3ul 加入裝有 3ml 復(fù)溶液 8.1ppb 的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為 8.1ppb。
標(biāo)準(zhǔn)液 5：取 1ml 標(biāo)準(zhǔn)液 6 加入裝有 2ml 復(fù)溶液 2.7ppb 的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為 2.7ppb。
標(biāo)準(zhǔn)液 4：取 1ml 標(biāo)準(zhǔn)液 5 加入裝有 2ml 復(fù)溶液 0.9ppb 的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為 0.9ppb。
標(biāo)準(zhǔn)液 3：取 1ml 標(biāo)準(zhǔn)液 4 加入裝有 2ml 復(fù)溶液 0.3ppb 的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為 0.3ppb。
標(biāo)準(zhǔn)液 2：取 1ml 標(biāo)準(zhǔn)液 3 加入裝有 2ml 復(fù)溶液 0.1ppb 的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為 0.1ppb。
標(biāo)準(zhǔn)液 1：直接使用復(fù)溶液，濃度即為 0ppb。
6.1 編 號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液或樣本 50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗體工作液 50µl/孔，輕輕振蕩 5 秒混勻，37℃避光反應(yīng) 30 分鐘。
6.3 洗 滌：將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液 250µl/孔充分洗滌 5 次，每次間隔 30 秒，最后用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6.4 加酶反應(yīng)：加酶標(biāo)記物 100µl/孔，37℃避光反應(yīng) 30 分鐘。
6.5 洗 滌：同上
6.6 顯 色：加底物液 A 50µl/孔，再加底物液 B 50µl/孔，輕輕振蕩 5 秒混勻，37℃避光顯色 15 分鐘（若藍(lán)色過淺，可適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間）。
6.7 終 止：加終止液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。
6.8 測吸光值：用酶標(biāo)儀于 450nm 處測定每孔吸光度值（建議用雙波長 450/630nm）。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后 10 分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值，再乘以 100%，即
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 A0—0ppb 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實(shí)際濃度。若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來電索取）
8 注意事項(xiàng)
8.1 室溫低于 25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻，洗板要徹底，在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0 標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于 0.5 個(gè)單位（A450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲(chǔ)藏條件：試劑盒于 2-8℃保存，避免冷凍。
保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為 1 年，生產(chǎn)日期見包裝盒。
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