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科研ELISA 科研人Elisa 科研大鼠Elisa 科研小鼠Elisa 科研倉(cāng)鼠Elisa 科研兔Elisa 科研豬Elisa 科研其它Elisa 科研魚(yú)Elisa 科研豚鼠Elisa 科研雞Elisa 科研鴨Elisa 科研猴Elisa 科研牛羊馬類(lèi)Elisa 科研藥物殘留ELISA 科研植物Elisa
農(nóng)殘及其它檢測(cè) 動(dòng)物金標(biāo)試劑盒 金標(biāo)試劑盒 毒素Toxin 致病菌 動(dòng)物保健 食品添加劑 生理活性物 色素Pigment 科研項(xiàng)目 農(nóng)藥Pesticide 抗生素Antibiotic 性激素Hormone 瘦肉精β-agonists 重金屬Heavy-Metal 其他食品檢測(cè)試劑盒 過(guò)敏原/營(yíng)養(yǎng)抑制因子 防霉劑Mold inhibitor 抗病毒Antivirus drug 保化添加物 水產(chǎn)殺菌劑 動(dòng)物酶免試劑盒 酶免試劑盒 其他檢測(cè)類(lèi) 環(huán)境污染物 乳品添加物 材料助劑 食品加工危害物
PCR試劑盒 PCR檢測(cè)試劑盒 探針?lè)╭PCR試劑盒
生化試劑盒 氧化磷酸化系列 植物激素系列 氧化與抗氧化系列 果膠系列 輔酶Ⅱ系列 谷胱甘肽系列 維生素C代謝系列 氮代謝系列 氨基酸代謝系列 酯酶系列 三羧酸循環(huán)系列 糖酵解系列 蛋白酶系列 脂肪酸代謝系列 淀粉系列 蔗糖系列 糖代謝系列 P450系列 離子系列 土壤系列 信號(hào)系列 其它系列 蛋白含量測(cè)定系列 糖異生系列 糖原系列 維生素系列 光合作用系列 輔酶Ⅰ系列 花青素合成系列 乙醛酸循環(huán)系列 海藻糖系列
酶聯(lián)抗體 一抗 內(nèi)參抗體 抗體相關(guān)支持試劑 標(biāo)簽抗體
動(dòng)物血清及細(xì)胞培養(yǎng) 胎牛血清 其他動(dòng)物血清 裂解血 小牛血清 新生牛血清 其他同類(lèi)產(chǎn)品 細(xì)胞檢測(cè)及細(xì)胞保護(hù)試劑 抗生素及選擇性試劑 細(xì)胞凍存液 培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)添加劑 動(dòng)物疫苗專(zhuān)用血清 診斷試劑專(zhuān)用血制品 新西蘭Bovogen血清
代理品牌 免疫學(xué)類(lèi) 分子學(xué)類(lèi) 生化學(xué)類(lèi)
二抗 AP標(biāo)記二抗 Biotin標(biāo)記二抗 HRP標(biāo)記二抗 PE標(biāo)記二抗 熒光標(biāo)記二抗 其他二抗
細(xì)胞系 人細(xì)胞系 豬細(xì)胞系 猴細(xì)胞系 小鼠細(xì)胞系 大鼠細(xì)胞系 其他細(xì)胞系
技術(shù)支持與外包實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)外包服務(wù) 技術(shù)支持 常見(jiàn)問(wèn)題
原代細(xì)胞 人原代細(xì)胞 大鼠原代細(xì)胞 小鼠原代細(xì)胞 兔原代細(xì)胞 豬原代細(xì)胞 其他原代細(xì)胞 雞原代細(xì)胞
細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 兔細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 人細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 細(xì)胞系專(zhuān)用培養(yǎng)基 小鼠細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 大鼠細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 其他細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 LUC細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 永生化細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基
完全培養(yǎng)基 完全培養(yǎng)基 人完全培養(yǎng)基 大鼠完全培養(yǎng)基 小鼠完全培養(yǎng)基 其他完全培養(yǎng)基
細(xì)胞庫(kù) 菌株 細(xì)胞株 永生化細(xì)胞 耐藥細(xì)胞株 熒光示蹤穩(wěn)株 luc示蹤細(xì)胞株 細(xì)胞凍存液
病理染色液 HE染色 骨組織染色 碳水化合物染色 固定液 結(jié)締組織染色 脫鈣液 酶類(lèi)染色 細(xì)胞染色 植物染色 指示劑 其他染色 微生物染色 核酸染色 金屬及鹽染色 神經(jīng)染色 脂類(lèi)染色 色素染色
生化試劑 氨基酸類(lèi) 蛋白質(zhì)類(lèi) 維生素類(lèi) 緩沖劑類(lèi) 培養(yǎng)基類(lèi) 酶類(lèi) 碳水化合物類(lèi) 色素類(lèi) 植物激素及核酸類(lèi) 表面活性劑類(lèi) 其他生化試劑 抗生素類(lèi) 測(cè)試盒類(lèi) 分離材料及耗材類(lèi) 其它試劑類(lèi) 石墨烯所有產(chǎn)品 常見(jiàn)生化試劑
標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品 中藥標(biāo)準(zhǔn)品 對(duì)照藥材 中檢所產(chǎn)品 標(biāo)準(zhǔn)溶液 化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品 中國(guó)計(jì)量院
細(xì)胞株 人源性細(xì)胞株 小鼠源性細(xì)胞株 大鼠源性細(xì)胞株 酵母菌 大鼠原代細(xì)胞 小鼠原代細(xì)胞 人原代細(xì)胞 兔原代細(xì)胞 其他原代細(xì)胞 其他源性細(xì)胞株
進(jìn)口國(guó)產(chǎn)培養(yǎng)基 美國(guó)藥典培養(yǎng)基 化妝品檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸桿菌、大腸菌群 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn) 消毒滅菌效果評(píng)價(jià) 臨床檢驗(yàn)用培養(yǎng)基 中華人民共和國(guó)藥典 歐洲藥典(EP) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法 微生物檢驗(yàn) 腸球菌、鏈球菌 沙門(mén)氏菌、志賀氏菌 弧菌 彎曲桿菌 李斯特氏菌 產(chǎn)氣莢膜梭菌 阪崎腸桿菌 乳酸菌、雙歧桿菌 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 一次性試管、液體培養(yǎng)基 乳酸菌檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定、無(wú)菌檢驗(yàn) 顯色培養(yǎng)基 植物組培
酶標(biāo)儀 酶標(biāo)儀 洗板機(jī)
細(xì)胞培養(yǎng)類(lèi) 細(xì)胞株 動(dòng)物細(xì)胞 人細(xì)胞類(lèi) 細(xì)胞分離液 細(xì)胞系 品牌細(xì)胞 ATCC細(xì)胞
英國(guó)IDS IDS EILSA劑盒
感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞 發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞 酵母感受態(tài)細(xì)胞 根癌農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞 克隆感受態(tài)細(xì)胞
農(nóng)牧食品殘留有害檢測(cè) 保化快速檢測(cè)系列 便攜綜合解決方案 非法添加快檢系列 劣質(zhì)油快篩系列 農(nóng)殘留快檢系列 獸殘疫病快檢系列 微生物快檢系列 重金屬快檢系列
其他試劑盒 其他產(chǎn)品
分子生物學(xué)試劑 DNA溶液 RNA溶液 蛋白電泳 蛋白其他 核酸電泳 核酸提取 核酸雜交 酶抑制劑 免疫印跡 核酸其他 分子生物學(xué)試劑 蛋白提取與檢測(cè)
標(biāo)準(zhǔn)溶液 標(biāo)準(zhǔn)溶液 滴定液
常規(guī)溶液 抗凝劑 其他溶液 藥典溶液
細(xì)胞生物學(xué)試劑 抗生素 細(xì)胞檢測(cè) 細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞其他 細(xì)胞組分分離
免疫學(xué)試劑 免疫學(xué)試劑
檢測(cè)試劑盒 生化檢測(cè) 酶類(lèi)檢測(cè) 植物檢測(cè) 氧化檢測(cè)
形態(tài)病理檢測(cè) 脫鈣 石蠟包埋 石蠟切片 普通病理染色 免疫組化熒光 切片全景掃描 TUNEL
分子病理 分子病理
超微病理 超微病理
生化檢測(cè)類(lèi) HPLC試劑盒 核苷酸系列 色素系列 抗生素殘留系列 植物黃酮系列 甾醇系列 木質(zhì)素單體系列 中藥成分系列 生物堿系列 生物胺系列 不飽和脂肪酸系列 動(dòng)物激素系列 花色苷系列 有機(jī)酸系列 植物多酚系列
酶聯(lián)產(chǎn)品
科研ELISA 科研人Elisa 科研大鼠Elisa 科研小鼠Elisa 科研兔Elisa 科研豬Elisa 科研雞Elisa
農(nóng)殘及其它檢測(cè) 動(dòng)物金標(biāo)試劑盒 金標(biāo)試劑盒 毒素Toxin 致病菌 動(dòng)物保健 食品添加劑 生理活性物 色素Pigment 科研項(xiàng)目 農(nóng)藥Pesticide 抗生素Antibiotic 性激素Hormone 瘦肉精β-agonists 重金屬Heavy-Metal 其他食品檢測(cè)試劑盒 過(guò)敏原/營(yíng)養(yǎng)抑制因子 防霉劑Mold inhibitor 抗病毒Antivirus drug 保化添加物 水產(chǎn)殺菌劑 其他檢測(cè)類(lèi) 環(huán)境污染物 乳品添加物 材料助劑 食品加工危害物
PCR試劑盒 PCR檢測(cè)試劑盒 探針?lè)╭PCR試劑盒
生化試劑盒 氧化磷酸化系列 植物激素系列 氧化與抗氧化系列 果膠系列 輔酶Ⅱ系列 谷胱甘肽系列 維生素C代謝系列 氮代謝系列 氨基酸代謝系列 酯酶系列 三羧酸循環(huán)系列 糖酵解系列 蛋白酶系列 脂肪酸代謝系列 淀粉系列 蔗糖系列 糖代謝系列 P450系列 離子系列 土壤系列 信號(hào)系列 其它系列 蛋白含量測(cè)定系列 糖異生系列 糖原系列 維生素系列 光合作用系列 輔酶Ⅰ系列 花青素合成系列 乙醛酸循環(huán)系列 海藻糖系列
酶聯(lián)抗體 一抗 內(nèi)參抗體 抗體相關(guān)支持試劑 標(biāo)簽抗體
二抗 AP標(biāo)記二抗 Biotin標(biāo)記二抗 HRP標(biāo)記二抗 PE標(biāo)記二抗 熒光標(biāo)記二抗 其他二抗
細(xì)胞系 人細(xì)胞系 豬細(xì)胞系 猴細(xì)胞系 小鼠細(xì)胞系 大鼠細(xì)胞系 其他細(xì)胞系
原代細(xì)胞 人原代細(xì)胞 大鼠原代細(xì)胞 小鼠原代細(xì)胞 兔原代細(xì)胞 豬原代細(xì)胞 其他原代細(xì)胞 雞原代細(xì)胞
細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 兔細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 人細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 細(xì)胞系專(zhuān)用培養(yǎng)基 小鼠細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 大鼠細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 其他細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 LUC細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基 永生化細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基
細(xì)胞庫(kù) 菌株 細(xì)胞株 永生化細(xì)胞 耐藥細(xì)胞株 熒光示蹤穩(wěn)株 luc示蹤細(xì)胞株 細(xì)胞凍存液
病理染色液 HE染色 骨組織染色 碳水化合物染色 固定液 結(jié)締組織染色 脫鈣液 酶類(lèi)染色 細(xì)胞染色 植物染色 指示劑 其他染色 微生物染色 核酸染色 金屬及鹽染色 神經(jīng)染色 脂類(lèi)染色 色素染色
酶標(biāo)儀 酶標(biāo)儀 洗板機(jī)
其他試劑盒 其他產(chǎn)品
細(xì)胞生物學(xué)試劑 抗生素 細(xì)胞檢測(cè) 細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞其他 細(xì)胞組分分離
免疫學(xué)試劑 免疫學(xué)試劑
形態(tài)病理檢測(cè) 脫鈣 石蠟包埋 石蠟切片 普通病理染色 免疫組化熒光 切片全景掃描 TUNEL
分子病理 分子病理
超微病理 超微病理
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枝頂孢霉PCR檢測(cè)試劑盒主圖

枝頂孢霉PCR檢測(cè)試劑盒

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  • 貨 號(hào):ml078769
  • 50T
    規(guī) 格:
    ¥1500.00元
    價(jià) 格:
    100T
    規(guī) 格:
    ¥3600.00元
    價(jià) 格:
  • 快速詢(xún)價(jià)     QQ:2881505708 免費(fèi)咨詢(xún)電話:021-54461587 / 021-54461730
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產(chǎn)品介紹:
 
產(chǎn)品名稱(chēng):枝頂孢霉PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng):Acremonium strictumPCR
 
 
組成及試劑配制:
 
1、 酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
 
 
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
 
1、樣本采集:各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
 
 
使用方法:
 
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等,具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說(shuō)明書(shū);陽(yáng)性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無(wú)需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽(yáng)性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
 
 
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
 
1.特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2.重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3.靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6.優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
 
 

用戶評(píng)論(共6條評(píng)論)

  • 辦事效率蠻高,幾天,就幫我搞定了這個(gè)試劑盒,謝謝!
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  • 操作挺方便的,也簡(jiǎn)單,當(dāng)然,這也多虧了公司的技術(shù)人員詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo),很好,謝謝,實(shí)驗(yàn)也相當(dāng)成功。
  • 實(shí)驗(yàn)出來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)曲線很不錯(cuò)(很優(yōu)美),而且價(jià)格相對(duì)合理,技術(shù)指導(dǎo)很到位......
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  • 經(jīng)朋友介紹,購(gòu)買(mǎi)了此公司的ELISA試劑盒,用過(guò),還不錯(cuò),實(shí)驗(yàn)效果很好,基本達(dá)到實(shí)驗(yàn)參數(shù)要求,如果,下次還做實(shí)驗(yàn)的話,我還買(mǎi)這家的,朋友這幾年都在用這家的(長(zhǎng)期訂貨)。

酶聯(lián)生物經(jīng)過(guò)不斷的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化和改進(jìn),積累了大量的經(jīng)驗(yàn),擁有專(zhuān)業(yè)的酶聯(lián)研發(fā)團(tuán)隊(duì)。利用專(zhuān)業(yè)的酶聯(lián)免疫技術(shù)自主研發(fā)的elisa試劑盒,能對(duì)血清及其它樣本定量檢測(cè)抗原,定性檢測(cè)特異性抗體。優(yōu)質(zhì)的試劑,先進(jìn)的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA檢測(cè)的方便性、穩(wěn)定性、重復(fù)性和可靠性方面都具有很大的優(yōu)勢(shì)。

ELISA檢測(cè)技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
1、雙抗體夾心法檢測(cè)抗原 2、間接法檢測(cè)抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術(shù)進(jìn)行樣本檢測(cè)。

以上代測(cè)費(fèi),凡購(gòu)買(mǎi)本公司試劑盒,我們免費(fèi)代測(cè)!
凡購(gòu)買(mǎi)本公司目錄任何一種酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒,您只需將需要檢測(cè)的動(dòng)物(Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey, Pig……)種類(lèi)和檢測(cè)指標(biāo)(白介素類(lèi)、激素類(lèi))及標(biāo)本數(shù)量(48T/96T)通知公司業(yè)務(wù)員即可。在接到客戶標(biāo)本當(dāng)日起,現(xiàn)貨產(chǎn)品一周內(nèi)將檢測(cè)報(bào)告交到客戶手中!
歡迎各科研單位在各種項(xiàng)目上與我們公司開(kāi)展不同層次的密切合作,以雙贏求發(fā)展,共同進(jìn)步,為中國(guó)檢測(cè)事業(yè)的發(fā)展積累經(jīng)驗(yàn)。

二、樣本要求
在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè),對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本,請(qǐng)?jiān)炷H〔暮螅瑢?biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,所以避免反復(fù)凍融。代測(cè)放免標(biāo)本的客戶取材前須向我司銷(xiāo)售人員索要說(shuō)明書(shū),具體操作注意事項(xiàng)請(qǐng)與我司技術(shù)人員溝通。

液體類(lèi)標(biāo)本:標(biāo)本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。

血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

血漿:應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

尿液、胸腹水、腦脊液:用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.0-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

三、寄標(biāo)本時(shí)需注明以下情況:
1、標(biāo)本編號(hào);2、所測(cè)項(xiàng)目;3、是否做復(fù)孔;3、聯(lián)系方式;4、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回。

客戶須知:
客戶應(yīng)對(duì)所提供的材料及信息負(fù)責(zé),如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。

 

PCR試劑盒成功的重要要素及注意事項(xiàng)

 

模板降解

 

1. 盡量選擇新鮮提取的模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增,通過(guò)凝膠電泳檢測(cè)模板的完整性,若降解嚴(yán)重需要重新制備模板。

2. 模板避免反復(fù)凍融。

 

模板中含有抑制 DNA 聚合酶活性的抑制劑

 

1. 采用離心柱法提取核酸,純化模板,消除抑制劑的干擾。

2. 適當(dāng)減少模板量,采用梯度稀釋摸索最佳模板量。

3. 選用抗逆性強(qiáng)的 DNA 聚合酶。

 

模板量太低

 

1. 適當(dāng)增加模板量。

2. 模板為 cDNA 時(shí),選用目的基因表達(dá)量高的組織提取高質(zhì)量 RNA 并選用基因克隆專(zhuān)用的反轉(zhuǎn)錄試劑盒得到的 cDNA 作為模板。

3. 選用靈敏度高的 DNA 聚合酶。

 

GC, 復(fù)雜模板

 

1. 使用 PCR 添加劑(比如 DMSO,甜菜堿)或 GC enhancer,促進(jìn)高 GC,復(fù)雜序列模板雙鏈解離從而有利于引物退火和序列延伸。

2. 增加變性時(shí)間或溫度,使 DNA 雙鏈徹底解離。

3. 選用適用于高 GC,復(fù)雜模板擴(kuò)增的 DNA 聚合酶。

 

長(zhǎng)片段

 

1. 確保模板的完整性。

2. 選擇適用于長(zhǎng)片段擴(kuò)增的 Taq DNA 聚合酶或者超強(qiáng)高保真 DNA 聚合酶。

3. 在試劑盒說(shuō)明書(shū)建議的延伸速度基礎(chǔ)上適當(dāng)延長(zhǎng)延伸時(shí)間。

4. 采用抑制熱交錯(cuò) PCR(Suppression Thermo-Interlaced PCR, STI PCR)策略。

 

引物降解

 

重新合成高質(zhì)量引物,少量分裝保存,防止多次凍融,避免長(zhǎng)期置于冰箱冷藏部分。

 

引物設(shè)計(jì)不合理

 

1. 建議使用引物設(shè)計(jì)軟件(比如Primer premier 6, Oligo 7等)設(shè)計(jì)并選取評(píng)分較高的引物。

2. 確保引物和模板結(jié)合的特異性。

 

DNA 聚合酶及其他反應(yīng)組分

 

1. DNA 聚合酶選擇不合適

2. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的 DNA 聚合酶,比如分子克隆實(shí)驗(yàn)中涉及到序列的高保真擴(kuò)增,需要選擇一款針對(duì)不同類(lèi)型序列具有普適性的高保真酶。

 

DNA 聚合酶活力下降

 

檢查試劑是否過(guò)期,按照說(shuō)明書(shū)要求合理保存試劑。

 

反應(yīng)緩沖液體系與目的基因不匹配

 

不同目的 PCR 反應(yīng)要求反應(yīng)緩沖液中的鎂離子、鉀離子、銨離子、化學(xué)添加劑等成分濃度是不一樣的,建議使用試劑盒中優(yōu)化好的緩沖液體系。

 

反應(yīng)條件

 

退火溫度不合適,影響引物與模板特異結(jié)合

1. 使用引物設(shè)計(jì)軟件建議的退火溫度,退火溫度一般比引物的 Tm 值低 5 ℃。

2. 不同的試劑鹽離子濃度不同,最佳的退火溫度可能存在差異,建議以軟件建議退火溫度為中心設(shè)置溫度梯度,來(lái)獲得最佳退火溫度。

3. 設(shè)置降落 PCR(Step-down)反應(yīng)程序。

 

其他反應(yīng)條件不合適

 

不同的 DNA 聚合酶試劑最佳反應(yīng)條件是有差別的,選用試劑說(shuō)明書(shū)建議的變性溫度和時(shí)間,退火時(shí)間,延伸溫度和速度,循環(huán)數(shù)。