產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品名稱：豬皰疹病毒 I 型染料法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Suid Herpesvirus-1(SuHV-1)
組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
樣本采集、存放及運輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
使用方法：
注：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理（樣本處理區(qū)）
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等，具體提取方法請參照相關(guān)說明書；陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取，可直接使用。
2. 擴增試劑準(zhǔn)備（PCR前準(zhǔn)備區(qū)）
取N個（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品）PCR反應(yīng)管，每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣（樣本處理區(qū)）
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。
特點優(yōu)勢：
1.特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
2.重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6.優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。
用戶評論(共6條評論)
酶聯(lián)生物經(jīng)過不斷的實驗優(yōu)化和改進，積累了大量的經(jīng)驗，擁有專業(yè)的酶聯(lián)研發(fā)團隊。利用專業(yè)的酶聯(lián)免疫技術(shù)自主研發(fā)的elisa試劑盒，能對血清及其它樣本定量檢測抗原，定性檢測特異性抗體。優(yōu)質(zhì)的試劑，先進的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA檢測的方便性、穩(wěn)定性、重復(fù)性和可靠性方面都具有很大的優(yōu)勢。
ELISA檢測技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：
1、雙抗體夾心法檢測抗原 2、間接法檢測抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術(shù)進行樣本檢測。
以上代測費，凡購買本公司試劑盒，我們免費代測！
凡購買本公司目錄任何一種酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，您只需將需要檢測的動物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey,
Pig……）種類和檢測指標(biāo)（白介素類、激素類）及標(biāo)本數(shù)量（48T/96T）通知公司業(yè)務(wù)員即可。在接到客戶標(biāo)本當(dāng)日起，現(xiàn)貨產(chǎn)品一周內(nèi)將檢測報告交到客戶手中！
歡迎各科研單位在各種項目上與我們公司開展不同層次的密切合作，以雙贏求發(fā)展，共同進步，為中國檢測事業(yè)的發(fā)展積累經(jīng)驗。
二、樣本要求
在收集標(biāo)本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測，對收集后當(dāng)天就進行檢測的標(biāo)本，及時儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本，請造模取材后，將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實驗質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。代測放免標(biāo)本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書，具體操作注意事項請與我司技術(shù)人員溝通。
液體類標(biāo)本：標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。
血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
血漿：應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10%（v/v）抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
尿液、胸腹水、腦脊液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.0-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
三、寄標(biāo)本時需注明以下情況：
1、標(biāo)本編號；2、所測項目；3、是否做復(fù)孔；3、聯(lián)系方式；4、實驗后標(biāo)本是否寄回。
客戶須知：
客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶承擔(dān)。
PCR試劑盒成功的重要要素及注意事項
模板降解
1. 盡量選擇新鮮提取的模板進行 PCR 擴增，通過凝膠電泳檢測模板的完整性，若降解嚴重需要重新制備模板。
2. 模板避免反復(fù)凍融。
模板中含有抑制 DNA 聚合酶活性的抑制劑
1. 采用離心柱法提取核酸，純化模板，消除抑制劑的干擾。
2. 適當(dāng)減少模板量，采用梯度稀釋摸索最佳模板量。
3. 選用抗逆性強的 DNA 聚合酶。
模板量太低
1. 適當(dāng)增加模板量。
2. 模板為 cDNA 時，選用目的基因表達量高的組織提取高質(zhì)量 RNA 并選用基因克隆專用的反轉(zhuǎn)錄試劑盒得到的 cDNA 作為模板。
3. 選用靈敏度高的 DNA 聚合酶。
高GC, 復(fù)雜模板
1. 使用 PCR 添加劑（比如 DMSO，甜菜堿）或 GC enhancer，促進高 GC，復(fù)雜序列模板雙鏈解離從而有利于引物退火和序列延伸。
2. 增加變性時間或溫度，使 DNA 雙鏈徹底解離。
3. 選用適用于高 GC，復(fù)雜模板擴增的 DNA 聚合酶。
長片段
1. 確保模板的完整性。
2. 選擇適用于長片段擴增的 Taq DNA 聚合酶或者超強高保真 DNA 聚合酶。
3. 在試劑盒說明書建議的延伸速度基礎(chǔ)上適當(dāng)延長延伸時間。
4. 采用抑制熱交錯 PCR（Suppression Thermo-Interlaced PCR, STI PCR）策略。
引物降解
重新合成高質(zhì)量引物，少量分裝保存，防止多次凍融，避免長期置于冰箱冷藏部分。
引物設(shè)計不合理
1. 建議使用引物設(shè)計軟件（比如Primer premier 6, Oligo 7等）設(shè)計并選取評分較高的引物。
2. 確保引物和模板結(jié)合的特異性。
DNA 聚合酶及其他反應(yīng)組分
1. DNA 聚合酶選擇不合適
2. 根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇合適的 DNA 聚合酶，比如分子克隆實驗中涉及到序列的高保真擴增，需要選擇一款針對不同類型序列具有普適性的高保真酶。
DNA 聚合酶活力下降
檢查試劑是否過期，按照說明書要求合理保存試劑。
反應(yīng)緩沖液體系與目的基因不匹配
不同目的 PCR 反應(yīng)要求反應(yīng)緩沖液中的鎂離子、鉀離子、銨離子、化學(xué)添加劑等成分濃度是不一樣的，建議使用試劑盒中優(yōu)化好的緩沖液體系。
反應(yīng)條件
退火溫度不合適，影響引物與模板特異結(jié)合
1. 使用引物設(shè)計軟件建議的退火溫度，退火溫度一般比引物的 Tm 值低 5 ℃。
2. 不同的試劑鹽離子濃度不同，最佳的退火溫度可能存在差異，建議以軟件建議退火溫度為中心設(shè)置溫度梯度，來獲得最佳退火溫度。
3. 設(shè)置降落 PCR（Step-down）反應(yīng)程序。
其他反應(yīng)條件不合適
不同的 DNA 聚合酶試劑最佳反應(yīng)條件是有差別的，選用試劑說明書建議的變性溫度和時間，退火時間，延伸溫度和速度，循環(huán)數(shù)。
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